在微量样本核酸提取的重要环节中,除了已经介绍的微量样本DNA提取方案外,RNA提取面临的挑战显得尤为突出。这是因为RNA比DNA更容易降解且存在着内源性或外源性RNase,这使得某些微量样本的实验结果的可靠性和可重复性受到影响。针对这种情况,RNeasyMicro系列成为了您攻克这些难题的理想工具!该系列采用了QIAGEN经典的硅胶膜技术,结合专用的裂解和洗涤缓冲液,能够从微量样本中稳定提取高纯度的完整RNA,最低仅需10µl的洗脱体积,更有助于满足对下游应用高灵敏度的需求。
一个来自巴西的研究小组通过对比不同 RNA 提取方法,证实了该系列试剂盒在微量样本RNA提取中的卓越表现。在他们的研究中,研究人员对疟原虫样本进行了RNA提取,通过8种不同的提取方法(包括酚-氯仿萃取法、TRI保护液+Direct-zolRNAMiniPrepKit及RNAprotect保护液+RNeasyMicroKit等)进行比较。随后,研究团队对不同方法所提取的RNA进行了包括RNA浓度和完整性在内的质控分析,并开展了qPCR和RNA-seq分析。结果显示,在高寄生虫密度样本的RNA提取中,TRIzol和RNeasyMicroKit所获得的总RNA浓度最高,但TRIzol在qRT-PCR检测中表现出Cq信号过高,超出检测限,且RNA扩增效率较低。相反,使用RNAprotect+RNeasyMicroKit和TRI+Direct-zolRNAMiniPrepKit提取的RNA则显示出更低的Cq值,并且RNeasyMicroKit提取的RNA完整性更佳,能够有效去除基因组DNA,从而支持下游实验结果的准确性和灵敏度。因此,研究人员最终选择RNeasyMicroKit作为研究方案中的RNA提取工具,为后续微量RNA测序实验提供了扎实的保障。
RNeasyMicroKit广泛适用于多种类型的微量样本,包括流式分选细胞、穿刺样本及激光显微切割等多种来源的样本。该产品不仅在可靠的RNA提取方面表现优秀,还在多个新兴研究领域中得到了广泛应用。例如,长读长RNA-seq可直接测序全长转录本,这在RNA表观修饰检测(如甲基化)和探讨转录后基因表达调控机制中,显示了其重要性。然而,相较于传统的下一代测序(NGS)技术,长读长RNA-seq对RNA质量的要求更高。来自德国的研究人员在他们的实验中,使用RNeasyMiniKit提取了细菌RNA,并通过聚腺苷酸化为RNA添加了poly(A)尾,随后利用RNeasyMicroKit进一步纯化这些微量RNA,最终进行长读长RNA测序,取得了良好的效果。
此外,RNeasyMicroKit在肾脏类器官的转录和形态学评估中也展现出了其优越性。近年来,类器官逐渐受到关注,它们由机体自身组织或干细胞生成,通过3D培养形成具有原始组织结构的模型,对疾病研究具有重要应用。来自墨尔本的研究团队开发了一种从人诱导多能干细胞生成3D类肾器官的方案。由于不同细胞类型和比例的变化可能影响疾病相关转录变化的识别能力,因此研究小组专注于对分化后的肾脏类器官进行全面的转录和形态学评估。他们利用RNA测序技术对57个完整的类器官和8323个单细胞进行检测。在该研究中,如何在不同分化样本中保持稳定的RNA提取效率成为了重要难点,但RNeasyMicroKit的应用有效解决了这一问题,确保了RNA得率和质量的稳定,为后续高质量RNA测序奠定了基础。
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