尊龙凯时人生就博提供了一份详细的RFL-6大鼠成纤维细胞培养说明书，旨在指导科研人员有效地培养和处理这些细胞。以下是有关细胞培养的关键步骤和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称： RFL-6大鼠成纤维细胞
生长特性： 贴壁生长
冻存条件： 无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系： DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法： 第一次建议1:2传代。2天后更换培养基。备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，建议培养至良好状态后，完全充满培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在操作前，用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后放入超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。进行显微镜观察并记录不同倍数的照片（建议拍摄40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片视为细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况，若大部分细胞变圆并脱落，快速进行终止消化，添加>5ml完全培养基。
3. 轻轻吹打细胞，吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至80%覆盖培养瓶时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察至细胞变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使之脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱，若后期转入液氮罐，需在-80℃存放24小时以上再转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴解冻，确保无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能容易脱落，这属于正常现象。如脱落较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养。处理后继续进行传代，补充新培养基并放入培养箱中。

五、售后条款

尊龙凯时人生就博承诺在特殊情况下为客户提供重发服务，具体情况包括细胞运输过程中的损坏、污染及细胞活性问题等。请根据收到细胞后的实验结果，在指定时间内与我们联系以申请重发。若因客户原因导致的问题将不予重发。了解更多详情请访问我们的官方网站。