尊龙凯时人生就博提供了一种高效提取大鼠原代脂肪间充质干细胞的方法,适用于SD大鼠。以下是实验的详细步骤和注意事项。
1. 实验材料准备
首先,选择约2周龄或200克的SD大鼠。准备必要的灭菌器械,包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪以及磁珠等。同时,准备5mL注射器、022μm滤器、泡沫板和图钉以固定大鼠。同时,使用75%乙醇进行器械和实验环境的消毒。预备好无菌的PBS水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛及无菌培养瓶等。此外,需准备SD大鼠脂肪间质干细胞的完全培养基。
2. 实验操作流程
在超净工作台内,将所需物品进行紫外线消毒30分钟。配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶并进行过滤灭菌。将大鼠经颈部脱颈处死后,浸泡于75%酒精中2-3分钟,然后放置于超净工作台并固定于泡沫板上。小心剪开大鼠腹股沟部位的皮肤,暴露出脂肪组织。仔细地剪取脂肪组织并放入PBS中,尽量避免剪到血管。使用PBS清洗脂肪组织,并去除多余的血管和淋巴结。将脂肪组织剪碎至适宜大小(例如2mm×2mm),添加胶原酶,在37℃下进行消化,每隔5分钟轻轻摇动或持续搅拌。消化完成后,将细胞悬液转移至离心管,进行离心并丢弃上层脂滴泡沫和上清液,使用培养基重悬沉淀。将细胞悬液经过过滤后,再次离心并用培养基重悬,最后接种至培养瓶中。将培养瓶放入37℃、含5% CO2的培养箱中进行培养。
3. 注意事项
在整个实验过程中,务必保持无菌操作,以防止细胞污染。脂肪组织的剪取及清洗过程必须细致,以避免对细胞造成伤害或引入杂质。在消化过程中,应严格控制消化时间和温度,避免过度消化造成细胞损伤。离心和过滤时也需轻柔操作,以免引起细胞损失或破裂。
通过遵循以上步骤,可以有效提取大鼠原代脂肪间充质干细胞,助力生物医疗研究领域的发展,同时尊龙凯时人生就博将为您的科研提供更多支持。